注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
?
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。
2'-脫氧胸苷-5'-一酸二鈉鹽β-Amyloid (1-42 Specific) (D3E10) Rabbit mAb*基(2-基氧)硅烷

衛(wèi)茅(>99%，分子生物學級)DNAJC2/MPP11 (D6B1E) Rabbit mAb三（五氟代基）硅烷

2-基膦酸(>90%,植物激素級)SignalSilence® Puma siRNA I*硫基硅烷

硝酸鐵九水PAX9 (D9F1N) Rabbit mAb2，3，*基戊烷

松三糖DyLight™ 350 Phalloidin2，3，*基戊烷

聚二20000Rab11FIP1 (D9D8P) Rabbit mAb基二硅烷

對甲磺酸鈉PathScan® Total Androgen Receptor Sandwich ELISA Kit基(甲基)二甲基硅烷

高酸鈉一水(>97%,BR)β2-microglobulin (D8P1H) Rabbit mAb*基炔硅烷

SPDP；N-琥珀酰亞-(2-吡啶二硫代)酸酯BAF Complex Antibody Sampler Kit*基-2-炔氧基硅烷

2-氨基噻唑(>98%，BR)c-Myc (D84C12) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)基硫*基硅烷

化鈰七水MRP4/ABCC4 (D1Z3W) Rabbit mAb三基硅烷

D-阿拉伯糖(標準品)SMYD3 (D2Q4V) Rabbit mAb氧基-*基硅烷

D-阿拉伯糖Sin1 (D7G1A) Rabbit mAb*基疊氮化硅

三六氨絡鈷;六氨基化鈷Prostatic Acid Phosphatase (D3Y5P) Rabbit mAb*基硅烷化

米吐爾(>98%,BC)uPAR (D4Q5S) Rabbit mAb（*基硅烷）甲基氟代烷

鹽酸吡哆SimpleChIP® Human StAR Intron 1 Primers氨甲基*基硅烷

硅油Glycolysis II Antibody Sampler Kit1-甲基金剛烷

溴化鈉LGP2 (D3I3L) Rabbit mAb1-羥基金剛烷

甲狀腺結(jié)合球蛋白(TBG)ELISA試劑盒Phospho-FAK (Tyr861)  酸化粘著斑激酶500 ul

甲狀腺激素受體β(THRb)ELISA試劑盒Phospho-FAK (Tyr576/577)  酸化粘著斑激酶100 ul

甲狀腺過氧化物酶(TPO)ELISA試劑盒Phospho-FAK (Tyr925)  酸化粘著斑激酶100 ul

甲狀腺非肽激素(THAA)ELISA試劑盒Phospho-FAK (Tyr407)  酸化粘著斑激酶100 ul

甲狀腺刺激免疫球蛋白(TSI)ELISA試劑盒phospho-FAK (Tyr577)  酸化粘著斑激酶100 ul

甲狀旁腺激素相關蛋白(PTHrP)ELISA試劑盒FAF1  Fas相關1因子100 ul

甲狀旁腺激素1受體(PTH1R)ELISA試劑盒phospho-FAK (Ser732)  酸化粘著斑激酶100 ul

甲狀旁腺激素1-34(PTH 1-34)ELISA試劑盒FAK2/Pyk2  富含脯氨酸的酪氨酸激酶220 ul

甲狀旁腺激素1-34(PTH 1-34)ELISA試劑盒phospho-Pyk2 (Tyr402)  酸化富含脯氨酸的酪氨酸激酶2500 ul
腦膜炎奈瑟菌通用型PCR檢測試劑盒價格成纖維細胞生長因子受體3抗體Ethyl 2-(3-cya-4-hydroxyphenyl)-4-methyl-1,3-thiazole-5-carboxylate中文名：別名：分子式：C14H12N2O3S

GATA結(jié)合蛋白1伴侶蛋白抗體Ethyl 2-(3-cya-4-isobutoxyphenyl)-4-methyl-5-thiazolecarboxylate中文名：別名：分子式：C18H20N2O3S

F-box蛋白21抗體Ethyl 2-(3-formyl-4-hydroxyphenyl)-4-methylthiazole-5-carboxylate中文名：別名：分子式：C14H134S

FBXO4蛋白抗體Ethyl 2-(4-hydroxyphenyl)-4-methylthiazole-5-carboxylate中文名：別名：分子式：C13H133S

前列腺素E受體4相關蛋白抗體Febuxostat中文名：非布索坦別名：分子式：C16H16N2O3S
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。